Использование метода пульс-электрофореза для исследования ядерной ДНК при программируемой клеточной смерти у растений

Abstract

В настоящее время установлено, что под воздействием стрессоров различного происхождения в клетках растений индуцируется генетически детерминированный механизм программируемой клеточной смерти (ПКС). Этот процесс играет существенную роль в реализации программы индивидуального развития многоклеточных организмов и ответной реакции на стрессорное воздействие. Показано, что основным проявлением ПКС на биохимическом уровне, как у животных, так и у растений, является двухэтапная деградацией ДНК хроматина под действием эндонуклеаз. На первом этапе деградации ядерной ДНК при ПКС, атаке индуцированных эндонуклеаз подвергается ДНК хроматина в области относительно протяжённых розеточных петель. На этом этапе деградации хроматина с помощью гель-электрофореза регистрируют фрагменты ДНК длиной 50, 300 и 800 Kb (тысяч пар оснований). На следующем этапе, под действием эндонуклеаз, происходит деградация ДНК петель на фрагменты, кратные по длине нуклеосомной ДНК (180-200 Kb). При электрофоретическом разделении таких фрагментов регистрируется один из характерных признаков ПКС - так называемая "нуклеосомная лесенка".